MNG超高純度一抗在多重?zé)晒饷庖邫z測中的應(yīng)用與標(biāo)準(zhǔn)化探討

內(nèi)容簡介：
本文聚焦于多重?zé)晒饷庖呓M織化學(xué)（mIHC）和流式細(xì)胞術(shù)（CyTOF/Flow Cytometry）等前沿技術(shù)，詳細(xì)闡述了抗體特異性、親和力及熒光標(biāo)記效率對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的決定性影響。文章重點(diǎn)分析了MNG品牌通過單B細(xì)胞克隆技術(shù)制備的高特異性單克隆一抗，其經(jīng)過嚴(yán)格驗(yàn)證（KO/WT細(xì)胞驗(yàn)證、質(zhì)譜驗(yàn)證）和標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)記流程，如何確保在多重檢測中實(shí)現(xiàn)最小的交叉反應(yīng)、最高的信號(hào)分辨率以及批次間一致性。本文為腫瘤微環(huán)境分析、免疫細(xì)胞分型等復(fù)雜研究領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供了關(guān)鍵的技術(shù)參考和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞： 單克隆抗體、多重?zé)晒鈾z測、免疫組織化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)、交叉反應(yīng)

正文：

隨著對(duì)生命系統(tǒng)復(fù)雜性的認(rèn)知日益深入，科研人員迫切需要能夠在單細(xì)胞水平同時(shí)檢測數(shù)十種甚至上百種蛋白分子的技術(shù)。多重?zé)晒饷庖邫z測技術(shù)，特別是成像質(zhì)譜流式（Imaging Mass Cytometry, IMC）、多重免疫熒光（mIHC/mIF）和高參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)，滿足了這一需求。然而，這些技術(shù)的成功高度依賴于其核心試劑——抗體的質(zhì)量，尤其是用于識(shí)別靶抗原的一抗。

一、 多重檢測對(duì)一抗質(zhì)量的要求

多重檢測的原理是使用不同熒光染料或金屬同位素標(biāo)簽標(biāo)記的抗體，同時(shí)與樣本中的多種靶抗原結(jié)合，通過區(qū)分不同的發(fā)射光譜或原子質(zhì)量來解析多個(gè)靶標(biāo)。這對(duì)抗體提出了挑戰(zhàn)：

1. 特異性：抗體必須僅與其目標(biāo)抗原表位結(jié)合， absolutely 不能與其他蛋白或彼此之間發(fā)生交叉反應(yīng)。任何非特異性結(jié)合都會(huì)產(chǎn)生假陽性信號(hào)，導(dǎo)致數(shù)據(jù)解讀錯(cuò)誤。

2. 優(yōu)異的親和力：抗體需要具有高親和力（Affinity）和 avidity，以在復(fù)雜的組織或細(xì)胞樣本中有效結(jié)合低豐度靶標(biāo)，產(chǎn)生足夠強(qiáng)的檢測信號(hào)。

3. ** minimized 交叉反應(yīng)**：在物種交叉反應(yīng)方面，用于檢測人源靶標(biāo)的一抗不應(yīng)與實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中可能存在的其他物種（如小鼠、大鼠）的同類蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)，特別是在人源化小鼠模型研究中。

4. 兼容性：所有一抗及其對(duì)應(yīng)的二抗必須來源于同一宿主物種，且彼此間無相互作用，才能進(jìn)行多重標(biāo)記。

二、 MNG超高純度一抗的制備與質(zhì)控優(yōu)勢(shì)

MNG采用優(yōu)良的技術(shù)平臺(tái)生產(chǎn)并驗(yàn)證一抗，以滿足多重檢測的苛刻標(biāo)準(zhǔn)。

1. 單B細(xì)胞克隆技術(shù)：通過流式細(xì)胞術(shù)分選抗原特異性的單個(gè)B細(xì)胞，克隆其抗體基因，重組表達(dá)獲得單克隆抗體。此技術(shù)從源頭上保證了抗體的單克隆性和批次間無限可重復(fù)性。

2. ** rigorous 驗(yàn)證策略**：

• Knockout/Wild-type驗(yàn)證：這是驗(yàn)證抗體特異性的“金標(biāo)準(zhǔn)"。通過比較野生型細(xì)胞和靶基因敲除細(xì)胞（KO）的染色結(jié)果，可以直觀地確認(rèn)抗體信號(hào)是否依賴于目標(biāo)蛋白的存在。MNG對(duì)其多數(shù)一抗提供基于CRISPR-Cas9技術(shù)的KO驗(yàn)證數(shù)據(jù)。

• 質(zhì)譜（MS）驗(yàn)證：對(duì)于免疫沉淀（IP）抗體，通過IP后質(zhì)譜分析，確認(rèn)其下拉的蛋白主要為目標(biāo)蛋白，而非非特異性結(jié)合蛋白。

• 重組蛋白驗(yàn)證：確保抗體能與重組的目標(biāo)蛋白反應(yīng)。

3. 標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)記工藝：MNG提供即用型的預(yù)標(biāo)記一抗（偶聯(lián)了各種熒光染料、生物素或金屬標(biāo)簽）。其標(biāo)記過程在嚴(yán)格控制下進(jìn)行，確保每個(gè)抗體分子上標(biāo)記的染料/標(biāo)簽數(shù)量（F/P ratio）達(dá)到，既保證了熒光強(qiáng)度，又避免了因過度標(biāo)記導(dǎo)致的抗體失活或聚集。嚴(yán)格的純化步驟去除了未結(jié)合的游離染料和過度標(biāo)記的抗體，保證了產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

三、 在復(fù)雜應(yīng)用中的價(jià)值體現(xiàn)

• 腫瘤微環(huán)境（TME）解析：利用MNG經(jīng)過驗(yàn)證的CD3, CD4, CD8, CD20, CD68, FoxP3, PD-1, PD-L1, Pan-CK等抗體組合，通過mIHC或IMC技術(shù)，可以在同一張組織切片上原位揭示不同免疫細(xì)胞（T細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）的空間分布、活化狀態(tài)及其與腫瘤細(xì)胞的相互作用，為癌癥免疫治療研究和生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)提供強(qiáng)大工具。

• 高參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)：使用MNG高質(zhì)量預(yù)標(biāo)記抗體 panel，可以在單細(xì)胞水平對(duì)外周血或組織解離液中的數(shù)十種免疫細(xì)胞亞群（如初始T細(xì)胞、記憶T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、各種B細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞）進(jìn)行精細(xì)分型和功能狀態(tài)分析，深度挖掘免疫系統(tǒng)的變化。

為確保此類復(fù)雜實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，可靠的試劑供應(yīng)鏈至關(guān)重要。在科研單位領(lǐng)域，上海易匯生物針對(duì)實(shí)驗(yàn)樣本存儲(chǔ)需求，同步提供樣本保存試劑的現(xiàn)貨供應(yīng)與定制化期貨服務(wù)，解決了科研單位 “緊急實(shí)驗(yàn)缺耗材、長期需求難規(guī)劃" 的痛點(diǎn)。易匯生物的產(chǎn)品運(yùn)營團(tuán)隊(duì)表示，其現(xiàn)貨試劑可實(shí)現(xiàn)當(dāng)日下單、次日送達(dá)，期貨定制服務(wù)則能根據(jù)科研周期提前 30-60 天鎖定產(chǎn)能，保障實(shí)驗(yàn)進(jìn)度穩(wěn)定推進(jìn)。 這種靈活供應(yīng)模式與MNG一抗的高品質(zhì)相結(jié)合，為研究人員開展長期、復(fù)雜的多重檢測項(xiàng)目提供了堅(jiān)實(shí)的后勤保障。