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——高效、靈敏的實時熒光定量PCR（qPCR）解決方案
337839 Qiagen qBiomarker SYBR Fluor Mastermix 是德國凱杰（QIAGEN）公司推出的高靈敏度實時熒光定量PCR預混液，專為基于SYBR Green染料的qPCR實驗設計。該產品包含優化配方的反應緩沖液、高保真HotStart DNA聚合酶、dNTPs及SYBR Green I染料，適用于基因表達分析、SNP分型、病原體檢測等應用場景。
核心參數：
貨號：337839
規格：25 mL（可滿足250次20 μL反應）
保存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融
有效期：24個月（未開封）
適用儀器：兼容Bio-Rad、Applied Biosystems、Eppendorf等主流qPCR儀
高靈敏度與特異性
HotStart技術：化學修飾的DNA聚合酶在95℃高溫下激活，有效抑制非特異性擴增，減少引物二聚體形成。
SYBR Green I優化：染料與雙鏈DNA結合效率高，熒光信號強，適用于低豐度模板的檢測（可檢測至單拷貝基因）。
寬動態范圍與高重復性
線性范圍：覆蓋7個數量級（101–10?拷貝），適用于絕對定量與相對定量分析。
批間差異：CV值<5%（基于NIST標準品驗證），確保實驗結果可靠性。
便捷性與兼容性
即用型配方：無需額外添加MgCl?、dNTPs或染料，簡化實驗流程。
ROX校正選項：部分型號預混ROX染料，適用于需要ROX校正的儀器（如ABI 7500 Fast）。
試劑與耗材
qBiomarker SYBR Fluor Mastermix（貨號337839）
引物（終濃度100-900 nM，建議使用QIAGEN OligoPerfect Primer Design工具設計）
cDNA模板（1-100 ng/反應，根據目標基因豐度調整）
無核酸酶水（Nuclease-Free Water）
八聯管或96孔板（建議使用白色不透明板以減少熒光信號損失）
儀器設置
預變性：95℃ 5分鐘
40個循環：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（退火溫度根據引物Tm值調整）
熔解曲線分析：60℃→95℃，每0.5℃采集一次熒光信號
溫度程序：
熒光通道：選擇SYBR Green通道（如ABI儀器為FAM/SYBR通道）。
反應體系配制（以20 μL體系為例）：
| 成分 | 體積（μL） |
|---|---|
| qBiomarker Mastermix | 10 |
| 正向引物（10 μM） | 0.4 |
| 反向引物（10 μM） | 0.4 |
| cDNA模板 | 2 |
| 無核酸酶水 | 7.2 |
加樣與離心
使用多通道移液器加樣，避免氣泡產生。
離心（2000 × g，1分鐘）確保液體沉至管底。
上機運行
將八聯管或96孔板放入qPCR儀，運行預設程序。
實時監測熒光信號，保存原始數據（Ct值、熔解曲線）。
Ct值判斷
推薦Ct值范圍：15-30（Ct>35需驗證擴增特異性）。
陰性對照（NTC）Ct值應無擴增（Ct>40或未檢測到）。
熔解曲線分析
單一峰型（Tm值±0.5℃）表明特異性擴增。
多峰或肩峰提示引物二聚體或非特異性擴增，需優化引物或反應條件。
定量方法
絕對定量：使用標準曲線法，構建已知濃度模板的Ct值與拷貝數關系。
相對定量：采用2?ΔΔCt法，以內參基因（如GAPDH）歸一化。
引物優化
使用QIAGEN OligoAnalyzer工具評估引物二聚體形成風險。
梯度PCR確定最佳退火溫度（Tm±5℃）。
模板質量控制
使用Nanodrop檢測RNA純度（OD260/280 1.9-2.1，OD260/230 >2.0）。
瓊脂糖凝膠電泳確認RNA完整性（真核生物應可見28S、18S、5S三條帶）。
儀器校準
定期使用NIST標準品驗證儀器熒光檢測準確性。
確保ROX校正功能正常（如適用）。
安全規范
避免反復凍融，分裝后保存。
操作時佩戴手套，避免交叉污染。
操作細節
移液精度：使用校準后的移液器，誤差<±1%。
加樣順序：先加Mastermix，再加引物和模板，最后加無核酸酶水。
故障排除
無擴增信號：檢查引物質量、模板濃度及反轉錄效率。
Ct值偏大：優化退火溫度、延長延伸時間或提高模板投入量。
用戶反饋：
“qBiomarker Mastermix顯著降低了Ct值，提高了低豐度基因的檢測靈敏度。"
“熔解曲線分析功能幫助我們快速識別非特異性擴增，優化了實驗條件。"
當前位置：
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傳真：QQ1006909781