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——高效、精準的下一代測序解決方案
Illumina MS-102-2003 MiSeq Reagent Kit v2（500 cycles）（貨號：MS-102-2003）是一款專為Illumina MiSeq測序平臺設計的高通量基因測序試劑盒，采用邊合成邊測序（SBS）技術，支持長達500個循環的測序反應，單次運行可生成高達8.5 Gb的數據輸出，適用于全基因組重測序、轉錄組分析、宏基因組學及靶向測序等應用場景。
核心參數：
規格：500 cycles
數據輸出：8.5 Gb（500 cycles）、5.1 Gb（300 cycles）、1.2 Gb（300 cycles Micro Kit）、0.850 Gb（50 cycles）
讀長：雙端測序（Paired-End）支持2×250 bp（標準配置），最長可擴展至2×300 bp
試劑類型：簇生成、雙端測序、邊合成邊測序
系統兼容性：研究模式下的MiSeqDx、MiSeq FGx及標準MiSeq系統
儲存條件：-20℃避光保存，解凍后避免反復凍融
高通量與長讀長
雙表面成像技術：與v1試劑盒相比，雙表面成像使每個流動槽的通量翻倍，片段數增加2倍。
長讀長支持：500 cycles試劑盒可擴展片段長度，適用于復雜基因組區域解析（如結構變異檢測）。
高效化學過程
改良的簇密度：通過優化化學配方，簇密度提升30%，減少循環時間。
高質量測序：Q30得分（質量值≥30的堿基比例）≥80%，確保堿基識別準確性。
靈活配置
多規格選擇：提供50、300、500 cycles三種循環數規格，滿足不同實驗需求。
Micro/Nano規格：適用于低通量應用（如Micro Kit：1.2 Gb/300 cycles；Nano Kit：0.5 Gb/500 cycles）。
智能交互與兼容性
RFID編碼：所有組件均采用RFID編碼，與MiSeq系統智能交互，驗證兼容性并減少操作誤差。
廣泛適配：兼容研究模式下的多種MiSeq系統，支持Illumina Advantage大規模測序產品（如特定批次出貨、延長保質期）。
試劑與耗材
Illumina MS-102-2003 MiSeq Reagent Kit v2（500 cycles）
MiSeq測序儀及配套流動槽
文庫構建試劑（如TruePrep RNA Library Prep Kit for Illumina）
Qubit定量儀、NaOH變性試劑、冰水混合物（冰:水=3:1）
文庫準備
使用文庫構建試劑生成測序文庫，并通過Qubit定量儀確定濃度。
將文庫稀釋至4 nM，用NaOH變性后，與預冷的雜交緩沖液（HT1）混合至20 pM終濃度。
添加5%比例的PhiX質控DNA以監控測序質量。
試劑盒準備
從-20℃冰箱取出試劑盒，室溫解凍后顛倒混勻。
準備冰水混合物預冷雜交緩沖液（HT1）。
上機操作
啟動MiSeq測序儀，選擇“Sequence"模式并加載試劑盒。
創建Sample Sheet文件，定義樣本信息及運行參數（如讀長、循環數）。
建議初始上機濃度為4 pM，后續可根據結果調整至8 pM。
測序運行
單次運行時間：約27-48小時（具體時間取決于讀長和循環數）。
運行結束后，系統自動生成FASTQ格式數據文件。
數據分析：推薦使用Illumina BaseSpace平臺或第三方工具（如BWA、GATK）進行數據處理。
試劑盒儲存：未使用的試劑需重新密封，-20℃保存。
廢棄物處理：按實驗室生物安全規范處理。
優化文庫質量
確保文庫片段分布均勻，避免小片段（<100 bp）過量導致測序失敗。
使用Agilent Bioanalyzer或TapeStation驗證文庫質量。
提高測序通量
結合雙表面成像技術，選擇500 cycles試劑盒以每個流動槽的通量。
對于低通量需求，可選擇Micro或Nano規格試劑盒。
質量控制
運行前檢查儀器狀態，避免硬件故障導致數據丟失。
監控Q30得分和覆蓋度（目標區域測序深度需≥30×）。
安全規范
操作時佩戴手套與護目鏡，避免試劑接觸皮膚或吸入。
廢棄物需按化學危險品處理。
操作細節
移液精度：使用校準后的移液器，誤差<±1%。
溫度控制：確保試劑和文庫在規定溫度下儲存和處理。
故障排除
簇密度過高：降低上機濃度至4 pM以下。
信號飽和：檢查文庫濃度和流動槽狀態。
用戶反饋：
“MS-102-2003試劑盒顯著提高了測序通量，雙表面成像技術使數據輸出翻倍。"
“Q30得分穩定在85%以上，適用于高精度變異檢測。"
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